摘要：近几年的流行病学调查结果已经真实，95%的上呼吸道感染、大部分的下呼吸道感染疾病均为细菌外病原所引起，其中以病毒感染最为常见，在临床诊断中，对呼吸道病毒进行检测的诊断意义显著。本文出于对呼吸道病毒检测方法的发展情况进行分析的目的，对病毒分离培养、聚合酶链式反应、免疫技术、酶联免疫吸附测定法等进行了具体阐述。
关键词：呼吸道感染；病毒；检测方法；研究进展
所谓的呼吸道病毒就是在可以对呼吸道造成侵犯，诱发呼吸道局部病变，引起呼吸道组织器官病变的一种病毒。现阶段的研究显示，呼吸道病毒为人类发病与死亡的主要危险因素之一，已经引起了广泛的关注[1]。近几年对传染性疾病的不断研究中发现，病毒亚型、致病力以及患者的临床表现均发生了较大的变化，因此对呼吸道病毒的检测手段进行了解，并开展快速的病毒检测手段具有很大的必要性，应引起重视。本文对现阶段呼吸道病毒检测手段的具体形式进行了综述，详见下文。
1病毒分离培养
对于病毒检测工作而言，分离培养为目前最为经典的一种手段，其主要操作为[2]：对患者的鼻咽分泌物进行常规处理，接种在敏感细胞上，并在含有2%小牛血清的MEN培养基中进行生长，在37℃条件下进行旋转培养，并对细胞的连续变化进行观察，若是出现特征病变则视为阳性。经盲传3代后依旧未出现病变则证实为阴性。实践证实，尽管该手段具有较强的特异性，但是检测成本相对较高，在早期诊断以及疫情控制中不适合。
2聚合酶链式反应
所谓的聚合酶链式反应（PCR）就是可直接对病原体核酸进行检测的一种手段，其可以在感染的早期针对可疑病例展开及时准确的诊断。实践中发现，传统的PCR检测仅可以一次从标本中检出一种病毒，针对RNA病毒需展开逆转录，针对还未明确的病毒感染便无法下手，近段时间，PCR技术得到了一定的改进，包括多重实时定量PCR技术和巢式PCR技术等[3]。以下作详细介绍
2.1多重实时定量PCR 在传统PCR技术的基础上将荧光标记探针予以引入，使得PCR反应与扩增产物的检测工作可以同时完成，实现了实时定量检测，并且闭管检测也使传统PCR技术需应用电泳得到了避免，减少了标本污染机会；多重PCR技术可以在同一个PCR反应体系内加入两对或两对以上的引物，同时可以扩增出多个核酸片段，在多种病毒的检测中均具有良好的效果，高效且系统。曾有学者经多重PCR技术对急性呼吸道感染患儿展开了呼吸道标本中病毒检测，结果发现阳性率为47.0%，较常规检测方法高2倍以上[4]。
2.2巢式PCR 该项技术术语聚合酶链式反应的一种变异，经两对PCR引物可扩增出完整的片段。该项技术的主要优势为：若是第一次扩增出错，则第2段可以在错误的片段上进行引物配对，扩增的概率相对较低，具有较高的特异性[5]。
3免疫技术
3.1直接免疫荧光法 对于该项技术而言，其主要原理为经荧光素对病原抗体进行直接标记，从而形成特异性荧光抗体，而后经该抗体同细胞或者是组织中的抗原进行结合。在荧光显微镜下进行观察，便可以获得结果。
3.2间接免疫荧光法 该项检测手段的主要原理为：首先经特异性抗体同标本中的抗原进行结合，产生抗原-抗体的复合物，而后经间接荧光抗体同该复合物进行结合，形成抗原-特异性抗体-间接荧光抗体复合物，在荧光显微镜下进行观察，以复合物的发光情况为依据对检测的抗原进行判断。该检测手段的操作检点，特异性较高，可以实现多种病毒的同时检测，然实践中发现，其敏感性相对较低，由于参与的组分较多，因此容易受到干扰，应引起注意。
3.3抗碱性磷酸酶桥联酶标法 抗碱性磷酸酶桥联酶标法（APAAP）的主要原理为第一抗体同待测抗原进行特异性的结合，而后第二抗体产生显著的桥联效果，其中Fab段同第一抗体连接，另一段则是与AP-AAP复合物进行连接，经AP-AAP复合物中的碱性磷酸酶催化底物进行显色，从而达到鉴定抗原的效果。
4酶联免疫吸附法
ELISA法为临床上比较常用的一种检测手段，其主要是利用将一种抗原-抗议免疫反应同酶的高效催化作用进行有机结合，通过对酶与底物的显色反应对检测结果进行判断，特异性与敏感性均较高，临床应用广泛。
5其他技术
由于诸多新的呼吸道病毒被不断的发现，使得实验室检测工作面临着巨大的挑战，因此开发与发展多种呼吸道病毒感染检测技术具有很大的必要性，近几年相继有基因芯片技术、悬浮阵列技术等问世，其在病毒检测中的效果还有待进一步研究，值得对其给予关注。
参考文献：
[1]周一平，陆学东，陈小可，等.呼吸道病毒与成人下呼吸道感染相关性探讨[J].中华实用诊断与治疗杂志，2010，12（02）：347-349.
[2]石晶，孔晓慧.PCR技术在呼吸道病毒检测中的应用进展[J].医学综述，2011，21（17）：982-983.
[3]徐军，郭静霞，李浩，等.不明原因呼吸道感染疫情病原学分析[J].解放军医学杂志，2010，35（03）：252-255.
[4]Sung RY， Chan PK， Tsen T， et al. Identification of viral and atypical bacterial pathogens in children hospitalized with acute respiratory infec-tions in Hong Kong by multiplex PCR assays[J]. Journal of Medical Virology，2009，12（14）：287.
[5] Mahony JB. Detection of respiratory viruses by molecular methods[J]. Clinical Microbiology Reviews，2011，11（04）：211-213.
编辑/许言
