材料与方法
1.1 材料
1.1.1 仪器与设备 RE52CS-1型旋转蒸发器购自上海亚荣生化仪器厂，Q5200型超声波处理机购自昆山市超声仪器有限公司，MCR-3S型微波炉购自西安予辉仪器有限公司，SP-1901型双光束紫外可见分光光度计购自上海光谱仪器有限公司。
1.1.2 原料与试剂 大红袍品种新鲜荔枝购于泸州市合江县，其大小、形状和成熟度保持均一。试验中所用化学试剂均为分析纯。
1.2 方法
1.2.1 标准曲线的绘制 精确称取芦丁标准品适量，溶于30%乙醇溶液并配制成0.20 mg/mL的芦丁标准溶液。分别吸取上述标准溶液0、2.0、4.0、6.0、8.0、10.0 mL，置于6个50 mL的容量瓶中，加30%乙醇补至10.0 mL，再加50 g/L NaNO2 0.8 mL，摇匀静置6 min，加100 g/L硝酸铝0.8 mL，摇匀静置6 min，加1 mol/L的氢氧化钠10 mL，再用30%乙醇溶液稀释至刻度线，摇匀静置15 min，然后分别置于510 nm处测吸光度，绘制芦丁标准曲线，得回归方程。
1.2.2 总黄酮得率的测定 将荔枝壳总黄酮提取液蒸发浓缩至干，用30%乙醇溶液定容至25 mL，摇匀，放置过夜，再取1 mL该溶液置于50 mL容量瓶中。按1.2.1的方法，在510 nm处测定吸光度，再根据标准曲线求得浓度C（mg/mL）。
总黄酮得率（mg/g）=C×25×50/荔枝壳干物质的质量
1.2.3 总黄酮的提取 准确称取经烘干粉碎粒径为0.3 mm的荔枝壳粉末3.0 g于250 mL锥形瓶中，加入一定量60%的乙醇作提取剂，超声波辅助提取一定时间，然后在不同微波功率下辐射不同时间，取出冷却、过滤，2次重复，将2次滤液合并，按1.2.2的方法测总黄酮得率。
1.2.4 单因素试验 试验过程中以总黄酮得率为考察指标，探讨料液比（m/V，g∶mL，下同）、超声波提取时间、微波功率、微波辐射时间和微波辐射次数对总黄酮得率的影响。①料液比对荔枝壳总黄酮得率的影响。当提取剂为60%乙醇、超声波提取时间为30 min、微波功率为400 W、微波辐射时间为30 s时，2次重复，考察不同的料液比（1∶15、1∶25、1∶35、1∶45和1∶55）对总黄酮得率的影响。②超声波提取时间对荔枝壳总黄酮得率的影响。当提取剂为60%乙醇、料液比为1∶25、微波功率为400 W、微波辐射时间为30 s时，2次重复，考察不同的超声波提取时间（10、20、30、40和50 min）对总黄酮得率的影响。③微波功率对荔枝壳总黄酮得率的影响。当提取剂为60%乙醇、料液比为1∶25、超声波提取时间为30 min、微波辐射时间为30 s时，2次重复，考察不同的微波功率（100、200、300、400、500和600 W）对总黄酮得率的影响。④微波辐射时间对荔枝壳总黄酮得率的影响。当提取剂为60%乙醇、料液比为1∶25、超声波提取时间为30 min、微波功率为500 W时，2次重复，考察不同的微波辐射时间（10、20、30、40和50 s）对总黄酮得率的影响。⑤微波辐射次数对荔枝壳总黄酮得率的影响。当提取剂为60%乙醇、料液比为1∶25、超声波提取时间为30 min、微波功率为500 W，考察微波辐射次数对总黄酮得率的影响。第一次微波辐射30 s时取出冷却，测吸光度，再次辐射30 s，取出冷却，测吸光度，如此重复操作4次。
1.2.5 正交试验 在单因素试验基础上，对主要影响因素料液比、超声波提取时间、微波功率、微波辐射时间进行L9（34）正交试验，以获得最佳工艺条件，试验因素与水平见表1。
2 结果与分析
2.1 标准曲线方程
将所测数据进行线性回归，得回归方程为A=0.853 6C+0.000 4，相关系数r=0.996 6，式中，C（mg/mL）为溶液中总黄酮的浓度，A为溶液的吸光度。
2.2 单因素试验结果与分析
2.2.1 料液比对荔枝壳总黄酮得率的影响 由图1可知，总黄酮得率随着料液比的减少而增加，当料液比为1∶35、1∶45和1∶55时，总黄酮得率差别不大，因此，料液比采用1∶35较为合适。
2.2.2 超声波提取时间对总黄酮得率的影响 由图2可知，当其他条件一定时，总黄酮得率随着超声波提取时间的延长而提高，在超声波提取时间为30 min时达到最大，之后略有降低。从提取效率和节约成本的角度考虑，超声波提取时间选为30 min较为合适。
2.2.3 微波功率对总黄酮得率的影响 由图3可知，随着微波功率升高，总黄酮得率也随之升高，当微波功率为400 W时，溶液开始沸腾，在微波功率为500 W时达到最大值，微波功率为600 W时，总黄酮得率反而下降，这是因为温度太高使原料中的有效成分发生了变性或降解。因此，微波功率选为500 W。
2.2.4 微波辐射时间对总黄酮得率的影响 由图4可知，随着微波辐射时间的延长，总黄酮得率随之提高，开始的时候上升较快，当微波辐射时间为30 s时，溶液开始沸腾，并且微波辐射时间超过30 s后，总黄酮得率提高很缓慢，所以选择微波辐射时间为30 s。
2.2.5 微波辐射次数对总黄酮得率的影响 试验结果表明，随着微波辐射次数的增加，总黄酮得率也逐渐提高，超过2次以后增加较缓，考虑到节省时间，微波间歇辐射2次为宜。
2.3 正交试验结果与分析
由表2可知，各因素的影响排序为C>D>A>B，最佳工艺组合为A1B3C3D2，即最佳工艺条件为微波功率500 W、微波辐射时间30 s、料液比1∶30、超声波提取时间40 min、微波间歇辐射2次。在此条件下进行验证试验，结果表明，总黄酮得率为38.59 mg/g，稍低于正交试验的A1B3C3D3组合，考虑到两个条件下得率差别不大，为了尽可能节约能源、时间以及成本，最后还是选择A1B3C3D2作为最佳方案。
3 结论
超声波微波双辅助提取荔枝壳总黄酮的最佳工艺条件为：在常压下，当荔枝壳颗粒大小为0.3 mm时，选择60%乙醇作为提取剂，料液比为1∶30，超声波提取时间为40 min，微波功率为500 W，微波辐射时间为30 s，微波间歇辐射2次，在此条件下总黄酮得率可达38.59 mg/g。
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