铁皮石斛饮片对微生物生长的影响

材料与方法

1.1 试验材料

1.1.1 菌株。研究证明铁皮石斛对大肠杆菌的生长具有明显的抑制作用，对酵母菌的生长有明显的促进作用[1]。本研究选取大肠杆菌和酿酒酵母作为供试菌株，菌株由湖南中医药大学提供，制成菌悬液[1]，待用。

1.1.2 药物。铁皮石斛超微粉和常规细粉[1]，由湖南龙石山铁皮石斛基地有限公司提供。

1.1.3 培养基[9]。YPD液体培养基，用于培养酿酒酵母[1-2]。牛肉膏蛋白胨液体培养基，用于培养大肠杆菌。

1.2 试验方法

1.2.1 药液制备。分别称取适量的铁皮石斛超微粉和常规细粉加入到对应菌种的培养基中，拌匀[1]，达到所需的浓度，根据相关文献[1]的结果，使用0.04、0.06、0.08、0.10 g/mL等药物浓度研究对大肠杆菌生长的抑制作用，使用0.06、0.08、0.10、0.12 g/mL等药物浓度研究对酿酒酵母生长的促进作用，高压蒸汽灭菌后，冷却，待用。

1.2.2 超微铁皮石斛对大肠杆菌生长的抑制作用。分别向已灭菌的2种铁皮石斛饮片与液体培养基混合液中加入 0.1 mL对应的供试大肠杆菌菌液（以加菌液的培养基混合液作为参比）[1]，于摇床中37 ℃、120 r/min振荡培养24 h，取样，测OD660。

1.2.3 超微铁皮石斛对酵母菌生长的促进作用。分别向已灭菌的2种铁皮石斛饮片与液体培养基混合液中加入0.1 mL对应的供试菌菌液（以未加菌液的混合液作为参比），于摇床中28 ℃、120 r/min振荡培养48 h，取样，测OD660。

1.3 统计学分析

用SPSS 19.0软件处理数据，各分组所得计量数据用平均值表示，用t检验比较组间均值，P<0.05有统计学意义[1-2]。

2 结果与分析

2.1 铁皮石斛对大肠杆菌生长的抑制作用

由图1可知，铁皮石斛超微饮片和传统饮片在试验浓度范围内对大肠杆菌的生长均有抑制作用，并且超微饮片的抑制效果强于传统饮片。当2种铁皮石斛饮片的浓度为0.04～0.08 g/mL时，铁皮石斛超微饮片对大肠杆菌生长的抑制效果与传统饮片相比差异达显著或极显著水平（P<0.05或P<0.01），而0.10 g/mL铁皮石斛超微饮片对大肠杆菌生长的抑制效果优于铁皮石斛传统饮片，但二者相比没有显著性差异（P>0.05）。说明在一定浓度范围内，随着铁皮石斛浓度的增加，对大肠杆菌的抑制作用增强，但当浓度达0.10 g/mL及以上时，其抑制效果最好。虽然超微饮片的有效成分浸出率比传统饮片高，但差异不显著。

2.2 铁皮石斛对酵母菌生长的促进作用

由图2可知，铁皮石斛超微饮片和传统饮片在试验浓度范围内对酿酒酵母的生长均有促进作用，且超微饮片的效果优于传统饮片。当铁皮石斛浓度为0.08～0.12 g/mL时，超微饮片对酿酒酵母生长的促进效果与传统饮片相比差异达显著或极显著水平（P<0.05或P<0.01），而0.06 g/mL铁皮石斛超微饮片对酿酒酵母生长的促进效果强于传统饮片，但二者相比没有显著性差异（P>0.05）。这说明铁皮石斛对酿酒酵母生长的促进作用在一定浓度范围内随着浓度的升高而增加，由于超微饮片有效成分的浸出率比传统饮片大，铁皮石斛浓度达0.08 g/mL时就表现出明显的优势。

3 结论与讨论

大肠杆菌属于肠道的正常菌群，铁皮石斛能夠调整脾虚便秘小鼠肠道的大肠杆菌数[10]，铁皮石斛多糖含量为45%左右[11]，大量研究证明，铁皮石斛多糖对大肠杆菌有明显的抑制作用[12]，铁皮石斛多糖可能是铁皮石斛抑制大肠杆菌的主要成分。并且，脾虚便秘造模破坏了肠道细菌多样性，经2种铁皮石斛汤剂的治疗，可以使肠道的微生态得到一定的调整，发现超微50%量汤剂效果优于传统汤剂[13]。体内和体外试验均证明超微饮片的有效成分浸出率高于传统饮片。

酵母菌是肠道常见的有益菌，肠道酵母菌的改变也直接关系着肠道微生态平衡，七味白术散通过促进肠道酵母菌的繁殖，在治疗菌群失调腹泻中发挥着一定的作用[14]。铁皮石斛能促进肠道酵母菌数量的增加，调整脾虚便秘小鼠肠道微生态平衡，对脾虚便秘的治愈起到一定的效果，并且铁皮石斛超微饮片对肠道酵母菌的促进作用要强于传统饮片[10]，说明铁皮石斛中存在促进酵母菌生长的有效成分，有关具体成分还有待进一步研究。铁皮石斛超微饮片对酵母菌生长的促进作用优于传统饮片，进一步证明中药超微饮片有利于中药有效成分的浸出，提高中药利用度，节省中药材。

4 参考文献

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