材料与方法
1.1 试验材料及培养基
筛选菌株的土壤样品采自南四湖南阳湖区表层底泥。
基础LB液体培养基：酵母提取物（酵母浸粉）5 g，胰蛋白胨10 g，氯化钠10 g，蒸馏水1 000 mL;调节pH 值至7.0～7.2;1×105 Pa灭菌20 min。
基础牛肉膏蛋白胨固体培养基：琼脂10 g，牛肉膏3 g，蛋白胨10 g，氯化钠5 g，蒸馏水1 000 mL;调节pH值7.0～7.2;1×105 Pa灭菌20 min。
选择培养基：将不同重金属的离子试剂Pb（NO3）2、CoCl2、HgCl2、ZnSO4、CuSO4、Fe2（SO4）3分别加入基础培养基中，调节其至相应浓度。
1.2 菌株的分离与筛选
用LB液体培养基、牛肉膏蛋白胨培养基分别作液体基础培养基和固体基础培养基。取各个地点的待测土样，分别加入到已经装有无菌水的三角瓶中，在磁力搅拌器上搅拌后，使细菌与土样分离，充分洗脱，静置后取上清液加入到液体培养基中。在摇床上培养10～12h。取培养液涂布到的固体平板上。稀释培养液分别至10-1～10-6，共6种不同梯度，每个样品分别在6个平板培养3～4 d。待菌落长出后，从中选取菌落形态不同的菌种，菌种编号按照1A、1B、1C、1D等，代表1号样品中出现的不同菌种。将初筛得到的细菌分别接种到含Pb（NO3）2的平板上进行培养，设定质量浓度梯度，按50、100、150 mg/L……逐渐递增，经过不断提高铅离子浓度，确定微生物对Pb2+的喜好质量浓度和耐受限度，选择抗性最好的菌株进行培养[9]。
1.3 菌株鉴定
1.3.1 形态学特征观察 通过划线法将筛选得到的菌株接种到基础牛肉膏蛋白胨固体培养基，在恒温培养箱中30 ℃培养40～60 h，对菌落形态及显微镜下菌体细胞的形状进行观察。
1.3.2 16S rDNA基因测序和系统发育学分析 提取抗性菌株基因组DNA，使用通用引物27F/1492R扩增16S rDNA基因序列（27F：5′-AGAGTTTGATCCTGGCTCAG-3′;1492R：5′-GGTTACCTTGTTACGACTT-3′），送生工生物工程（上海）股份有限公司进行全长测序。将获得的序列与NCBI和RDP数据库中的现有数据进行比对，在数据库中选择同源性高的序列，使用MEGA 7.0软件包构建系统发育树以来判断抗性菌种的物种归属[10]。
