摘 要 目的：探讨乙型肝炎表面抗原/梅毒螺旋体抗体联合检测试剂（金标法）的敏感性、特异性。方法：采用ELISA法和金标法对768例血清样本同时进行检测，并且对结果进行对比分析。结果：768例样本中，用ELISA法检测HBsAg和TP全阴性的结果，金标法同样均为阴性；ELISA法检测HBsAg和TP阳性的，金标法检测结果有所改变，各单项指标经X2检验HBsAg检测结果的差异有统计学意义（P<0.01）；TP检测结果差异无统计学意义（P>0.05）。结论：两种方法对HBsAg和TP测定的特异性有差别，但是ELISA法敏感性更高。
关键词 金标法 ELISA法 HBsAg TP 敏感性 特异性
目前本站对无偿献血者献血前的初筛检验项目主要是ABO血型、HBsAg、抗-HCV、抗-HIV、TP，都采用快速检测试剂条。这里笔者主要对乙型肝炎表面抗原/梅毒螺旋体抗体联合检测试剂（金标法）加以探讨。乙型肝炎表面抗原的检测方法很多，血站实验室主要以ELISA法和金标法最常用。ELISA法在临床应用的时间较早，金标法是近年建立起来的免疫学检测法[1]。
梅毒的实验室检测方法主要有病原学检查和血清学试验，血清学试验又包括非梅毒螺旋体血清学试验和梅毒螺旋体血清学试验；梅毒螺旋体血清学试验包括梅毒螺旋体血球凝集试验（TPHA）、梅毒螺旋体明胶凝集试验（TPPA）、荧光梅毒螺旋体抗体吸附试验（FTA-ABS）、测定螺旋体抗体的血清学试验（ELISA）[2]。目前血站主要使用梅毒螺旋体抗体诊断试剂盒（ELISA）。
金标法：预期用途：乙肝表面抗原（HBsAg）为乙肝病毒的胞膜蛋白，本身不具有传染性，但它的出现常伴随乙肝病毒的存在，所以乙肝表面抗原阳性是乙肝病毒感染的标志。它可存在于患者的血液、唾液、乳汁、汗液等分泌物中。在感染乙肝病毒后2～6个月，可在血清中测到阳性结果。急性乙型肝炎患者大部分可在病情早期转阴，慢性乙型肝炎患者该指标可持续阳性，成为乙肝病毒携带者。梅毒螺旋体是引起人类梅毒的病原体，当病原体侵入人体后，可刺激机体免疫系统产生梅毒螺旋体特异性抗体。梅毒主要通过性接触、母婴垂直传播，也可通过血液传播，先天性梅毒临床主要表现以流产、死胎或梅毒儿，后天性梅毒临床依据感染过程分为3期，早期诊断是杜绝感染及时治疗的有效措施。乙型肝炎表面抗原/梅毒螺旋体抗体联合检测试剂，为定性检测人全血/血清/血浆中乙型肝炎病毒表面抗原和梅毒螺旋体抗体，适用于乙型肝炎表面抗原和梅毒螺旋体早期感染的辅助诊断。检测原理：乙型肝炎表面抗原/梅毒螺旋体抗体联合检测试剂采用胶体金免疫层析技术同时测定全血、血清或血浆中乙型肝炎表面抗原和梅毒螺抗体。在硝酸纤维素膜上依次包被乙型肝炎病毒表面抗原检测线、梅毒抗体检测线，以及对照线。当检测标本HBsAg/TP阳性时，标本中的乙肝表面抗原或梅毒抗体与胶体金标记的抗-Hbs单抗或TP抗原特异性结合，形成各自的复合物，如果是HBsAg复合物沿着硝酸纤维素膜层析至乙肝表面抗原检测线时，即与检测线上包被的抗-HBs单抗结合形成“Au-抗-HBs单抗-HBsAg-抗-HBs单抗”夹心结合物产生有色线条。若是TP复合物行至TP检测线时，即与检测线上包被的TP抗原结合形成“Au-TP抗原-TP抗体-TP抗原”夹心结合物产生有色线条。未结合的胶体金颗粒则富集在对照线处，使对照线呈现清晰可见的有色线条；被试的阴性样品只在对照线处显色。
酶联免疫法（ELISA）：预期用途：乙型肝炎病毒表面抗原和梅毒螺旋体抗体诊断试剂盒是定性检测人血清或血浆中的乙型肝炎病毒表面抗原（HBsAg）和梅毒螺旋体抗体（TP）。适用于血液筛查和临床乙型肝炎病毒表面抗原感染和梅毒螺旋体感染的辅助诊断。检验原理：两种试剂盒均采用双抗原夹心法酶联免疫吸附试验原理。
笔者专门对768例献血者血清样本同时使用两种方法进行检测比对，发现有个别ELISA法检测阳性或OD值在灰区（0.7～1.0）的金标法检测为阴性，再用不同厂家的试剂ELISA法复查结果仍为阳性或OD值在灰区，经反复检测ELISA法的敏感性和特异性均优于金标法，现将检测结果报告如下。
资料与方法
试剂和仪器：ELISA法试剂由北京万泰生物药业有限公司（A试剂）和厦门英科新创科技有限公司（B试剂）提供的；金标法试剂由厦门英科新创科技有限公司提供，试剂均在有效期内使用。全自动酶免系统由深圳爱康公司生产的Uranus 100和Uranus 120。
标本来源：2013年7-12月部分无偿献血者血样。
检测方法：所有样本均使用一次性真空负压管血袋留样，EDTA-K抗凝管。
ELISA法严格按照说明书操作，按照本检测项目的标准操作规程设置三阴两阳、QC1（低值）、QC2（高值）和NQC，HBsAg和TP检测方法均为双抗原夹心法酶联免疫试验原理。
参考值：HBsAg临界值计算（CUTOFF）：临界值=阴性对照空A均值NC×2.1（阴性对照空低于0.05者按0.05计算），阴性对照空A值≤0.10，阳性对照空A值≥0.08，否则实验无效。
TP临界值计算（CUTOFF）：临界值=阴性对照空A均值NC+0.18，阴性对照空A值≤0.10，阳性对照空A值≥0.08，否则实验无效；若有1孔阴性对照A值大于0.1应舍去；若两孔或两孔以上阴性对照A值大于0.1，应重复试验。
结果判定：样品A值<临界值（CUTOFF）者为阴性，样品A值≥临界值者为阳性，样本OD值在0.7～1.0为灰区（初试阳性反应或在灰区者重新血袋便管剪样双孔复试）。
乙型肝炎表面抗原/梅毒螺旋体抗体联合检测试剂（金标法）严格按照说明书操作。标本和试剂条平衡至室温（18～25℃）并编号，加样量必须在60～80μl滴加在加样处，15分钟最终观察并判断结果，超过30分钟后试验结果无效。
结果判断：观测区仅对照线（C）位置处出现一条带，HBsAg、TP均为阴性；在观测区同时出现三条带，HBsAg、TP均为阳性；在观测区，对照线（C）及HBsAg检测线（T1）位置处各出现一条带，HBsAg阳性、TP为阴性；在观测区，对照线（C）及TP检测线（T2）位置处各出现一条带，HBsAg，阴性、TP为阳性；观测区对照线（C）处没有条带出现或仅有检测线（T1、T2）处有条带，表示此次检测无效，必须换用新的试剂。
结 果
768例样本中，两项结果均为阴性的样本607例；HBsAg阳性样本137例，TP阳性的样本22例，其中金标法检测单项HBsAg阳性123例，TP单项阳性18例，HBsAg和TP均为阳性2例。ELISA法全阴性的结果金标法均为阴性；而ELISA法为阳性的结果金标法检测结果有所变化，两种方法检测出不同结果符合率，见表1。
HBsAg金标法和ELISA法比较，敏感度89.93%，特异度100%，经统计学分析X2=12.07，P<0.01，差异有统计学意义，也就是说有高度显著性；TP金标法和ELISA比较，敏感度83.33%，特异度100%；经统计学分析X2=2.25，P>0.05，差异无统计学意义，见表2。
ELISA法为阳性的各单项结果中，金标法的阳性符合率HBsAg 16.28%、TP2.6%；ELISA法为阴性的各单项结果中，金标法均为阴性，符合率均100%；两种方法各单项结果总符合率HBsAg 98.18%、TP 99.48%，见表3。
讨 论
两种方法对768例样本检测结果表明：金标法敏感性较ELISA法差，存在假阴性结果。与过去有文献报道相似[3]。通过对表1、2的分析可知：金标法对HBsAg和TP检测的敏感性较ELISA法差，尤其对低滴度样本监测结果较差，往往检测结果为假阴性；但对于现代血站来说，采血前的初筛检验是至关重要的，由于采集的血液需要离心、分离、成分制备等各个环节，这些环节若阳性标本越多，对工作环境产生污染的可能性越大；另外，对于采血和检验人员来说也可以减少采血和化验过程中的感染机会。还有金标法具有简便、快速、特异性较高、试剂稳定，无需检测仪器等特点，对抗原量过大的样品未出现“钩状效应”现象，故一般不出现假阴性[4]；此外，金标法随着反应时间的延长阳性率有所提高。因此，乙型肝炎表面抗原/梅毒螺旋体抗体联合检测试剂用于大量的无偿献血前的初筛检测和流行病学调查工作更为合适。
参考文献
1 庄严等.胶体金免疫层析法与酶联免疫吸附法结合使用在乙型肝炎检测中的应用[J].中国实验诊断学，2008，14（3）：180-181.
2 谢益君.梅毒的实验室诊断[J].中国卫生检验杂志，2008，2（3）：29-40.
3 陈瀑，康红.胶体金免疫层析法与检测乙型肝炎的评价[J].临床输血与检验，2003，5（5）：30-31.
4 丁邦胜，潘健.金标法与ELISA法检测乙型肝炎病毒血清标志物的比较[J].临床输血与检验，2012，14（3）：225-227.
