摘要：目的 探讨梅毒血清学方法筛查血液的临床效果。方法 选取我站2014年4月～8月无偿献血者血液标本1500份，采用TPPA（梅毒螺旋体颗粒凝集试验）、TP-ELISA（酶联免疫吸附试验双抗原夹心法）以及TRUST（甲苯胺红不加热血清反应素试验）这三种方法对所有血样予以平行检测，将TPPA法结果作为主要确诊标准，以探讨TRUST与TP-ELISA的阳性率。结果 TPPA法检测出6例阳性，TRUST法特异性为100.0%，TP-ELISA为99.80%，对比差异不明显，无统计学意义（P>0.05）；TRUST法灵敏度为27.41%，TP-ELISA为100.0%，对比差异明显，有统计学意义（P<0.05）。结论 TRUST法有较高漏检率，且灵敏度低，不适合筛查献血者血液；TPPA法则在确证梅毒阳性标本中比较适用；TP-ELISA法有优良特异性与高灵敏度，在批量较大样本中使用具有自动化检测与集中化优点，可用于筛查献血者血液，但在献血者召回中只能做为参考方法。
关键词：梅毒血清学；血液；TP-ELISA；TRUST；TPPA
梅毒属于性传播疾病，其主要诱因为梅毒螺旋体感染。梅毒主要传播方式为血液传播与性传播，且病情具有时显时隐特征，可对全身各个器官或者组织进行侵犯，亦可在胎盘传播下导致胎传梅毒[1]。对梅毒蔓延予以有效控制的关键在于快速且精准的实验室检查，因此在对梅毒螺旋体予以检测时一定要选用最科学的方法，作为采供血机构，既要保护献血者，又要保证献血安全。当前发现并诊断梅毒最主要的方法为血清学检测，且方法较多，各有优劣。本文为探讨TPPA、TP-ELISA以及TRUST检测梅毒螺旋体的效果，选取我站无偿献血者标本1500份，回顾性分析其资料，将详细情况报告如下。
1资料与方法
1.1一般资料 选取我站2014年4月～8月无偿献血者血液标本1500份，所有献血者在献血前均接受体格检查，按照《献血者健康要求》判定为合格。
1.2检测方法 采用TPPA、TP-ELISA以及TRUST这三种方法对所有血样予以平衡检测，将TPPA法结果作为主要确诊标准，以探讨TRUST与TP-ELISA的阳性率。双孔复查TPPA法阳性样本，若结果仍为阳性则代表梅毒阳性。
1.2.1TRUST主要用于性病研究实验室开展，将抗原在有特制甲苯胺红溶液中重悬后制作，试验于特制白色卡片上，以对血浆或者血清进行检验。先使用生理盐水对血清进行倍比稀释，再开展定量试验，用专用针头与滴管分别对TRUST试剂予以滴加，加入血清后摇动，速度为100转/min，持续8min后对结果予以观察，试验条件主要为23～29℃。
1.2.2 TPPA试验载体主要为生物红细胞，对TP粉碎物予以吸附后对血清中抗体进行抗原检测，且在人工载体明胶颗粒上对存在于致病性梅毒（纯化）中的精致菌株成分进行包被，降低生物学假阳性率，存在非特异性凝集现象但是出现率极低。
1.2.3 TP-ELISA主要制成试剂包括混合酶标记基因工程抗原、包被于梅毒螺旋体基因工程混合抗原的微孔反应板以及其他试剂，主要使用双抗原夹心法检测。在实验中均需设置阴阳性对照组孔（各3个）与空白对照组孔（1个），添加样本后孵育于37℃条件下，60min后洗板加酶，30min后再将底物添加进去以显色，主要使用的酶标仪为SUNRISE 450/630nm，空白置零后对各个孔吸光度值予以读取。
1.3统计学方法 应用软件SPSS21.0对所有数据行统计学处理，若P<0.05代表差异存在统计学意义。
2结果
TPPA、TP-ELISA以及TRUST梅毒血清学试验结果对比：1500份样本采用上述3种方式检测后有1例同时阳性，TPPA、TP-ELISA两种检测法6例同时阳性，TPPA以及TRUST1例同时阳性，TP-ELISA单种检测法阳性例数为3例，见表1。
3讨论
梅毒螺旋体主要于人体脊液或者血液中存在，不会生长繁殖于人工培养基上[2]。梅毒有先天性与后天性之分，先天性主要是胎儿被母体传播或者被血液感染，后天性感染方式主要为性传播。机体遭受梅毒病毒感染后3～6w检查患者血清会发现有两种抗体存在，其一为非螺旋体抗原抗体，其二为螺旋体抗原抗体。梅毒特异性抗体具有很早出现与很迟消失的特点，就算患者接受了正规抗梅毒疗法，再行血清检测时还是可将特异性抗体检测出来，有些甚至具有终身性。在对梅毒螺旋抗体感染进行诊断时主要依据为抗-TP，临床检测梅毒病毒主要采用血清学试验，包括TPPA、TP-ELISA、TRUST以及化学发光免疫分析法等。
据临床研究证实[3，4]，在梅毒螺旋体中其表面抗原分类较多，分类依据主要为相对分子质量，包括TP47、TmpA等。TP-ELISA法主要是对人工合成基因重组抗原进行利用再在反应板上包被，对特异性抗体IgM与IgG予以检测。在本研究中TRUST与TP-ELISA灵敏度为27.41%、100.0%，对比差异明显（P<0.05）。且TP-ELISA具备操作简易、可自动化检测、可靠性与客观度高、可保存归档原始资料等优点，故而适用于筛查无偿献血血液标本。由于该法抗原为重组故而可能会导致假阳性序列，本研究有3例假阳性。为防止假阳性导致献血者产生精神压力或者引发家庭纠纷，只要是标本用TP-ELISA法检测后结果为阳性，均需使用TPPA验证。
TRUST法主要对梅毒感染机体予以检测后，组织被螺旋体破坏后会将心磷脂这一抗原物质释放出来[5]，其会刺激机体出现反应素，其性质为抗体，且为非特异性，受到自身免疫疾病或传染病影响会产生假阳性。机体感染梅毒后特异性抗体比非特异性抗体早出现，而接受治疗后又会转阴，故而假阴性现象也存在。TRUST法检测出1例阳性，不存在假阳性现象，原因在于献血者已接受体格检查，排除红斑狼疮且类风湿患者，但是漏检率高。
TPPA法抗原主要为纯化梅毒螺旋体，再对特异性抗体进行检测，有较高的特异性与敏感度。但是由于该检测法为手工操作，吸液次数较多，若在大批量标本中使用会增加出错几率，因此该法在筛查无偿献血大批量血液样本中不具有适用性。
综上所述，TRUST法有较高漏检率，且灵敏度低，不适合筛查献血者血液；TPPA法则在确证梅毒阳性标本中比较适用；TP-ELISA法有优良特异性与高灵敏度，在批量较大样本中使用具有自动化检测与集中化优点，可用于筛查献血者血液。
参考文献：
[1]顾伟鸣，杨阳，吴磊，等.梅毒血清学试剂性能评估方案的优化及应用[J].检验医学，2014，18（11）：1169-1174.
[2]杨安芳.梅毒血清学检验中不同方法检定结果的观察分析[J].中国医药导刊，2014，12（1）：169-169，171.
[3]吴景良，李雪飞，王丹，等.住院患者梅毒血清学假阳性及梅毒检出情况报告[J].临床皮肤科杂志，2014，43（8）：474-475.
[4]钟娜，张丽芬，陆玉珠，等.272例梅毒孕妇所生新生儿梅毒血清学检测分析[J].中国麻风皮肤病杂志，2013，29（8）：544.
[5]韩雪，李红，曹守勤，等.3种梅毒血清学检测方法的对比分析[J].宁夏医科大学学报，2014，36（10）：1135-1137.编辑/申磊
