【摘要】 目的 研究VEGF及其受体FLK1在鼻咽癌中的表达,探讨VEGF与鼻咽癌生长的关系,为临床治疗鼻咽癌提供理论依据。方法 采用免疫组化SP法检测30例鼻咽黏膜慢性炎和40例鼻咽癌组织中VEGF、FLK1的表达。结果 VEGF和FLK1在鼻咽黏膜慢性炎中的阳性率分别为20.00%(6/30)和13.33%(4/30);在鼻咽癌中的阳性率分别为82.50%(33/40)和75.00%(30/40),与鼻咽黏膜慢性炎组比较差异均有显著性(P<0.001)。在鼻咽癌中VEGF和FLK1的表达有显著相关性(r=0.582,P<0.001)。结论 在鼻咽癌中,VEGF及其受体FLK1均呈高表达,VEGF可能通过旁分泌和自分泌方式对鼻咽癌的生长、增殖起着重要的调控作用,抑制VEGF的表达可以是治疗鼻咽癌的一个靶点。
【关键词】血管内皮生长因子(VEGF);血管内皮生长因子受体(FLK1);鼻咽癌(NPC)
Expression and clinical significance of VEGF and FLK1 in Nasopharyngeal Carcinoma
LIANG Junhui.Medcial College of Shaoguan University,Shaoguan 512026,China
【Abstract】 Objective To detect the expression of VEGF and FLK1 in NPC,and to evaluate the relationships of VEGF with the growth of it,in order to provide the theory for clinical treats NPC.Methods Immunohistochemical(IHC)methods(SP)were used to examine the expression of VEGF and FLK1 in paraffinembedded speciments of 30 chronic nasopharyngitis and 40 NPC.Results The positive rates of VEGF and FLK1 protein expression in chronic nasopharyngitis were 20.00%(6/30)and 13.33%(4/30)in respective; the positive rates of two protein were 82.50%(33/40)and 75.00%(30/40)in NPC,with significant difference compared with chronic nasopharyngitis respectively(P<0.001).In NPC spearman correlation analysis showed there were significant correlation between the expression on VEGF and FLK1.Conclusion In NPC,there were obvious positive expression of VEGF and FLK1,VEGF might have important regulatory effects on growth and proliferation of the nasopharyngeal carcinoma cells by the pathway of autocrine and paracrine,restraining the expression of VEGF could become a favourable target on the therapy of NPC.
【Key words】Vascular endothelial growth factor(VEGF); Vascular endothelial growth factor receptor(FLK1);Nasopharyngeal Carcinoma(NPC)
近30年來肿瘤领域研究的最大进展之一就是确立了肿瘤血管生成在肿瘤发展中的主要地位与抗血管生成治疗肿瘤的意义。原发肿瘤和继发转移瘤的生长扩散都依赖新生血管的形成。因此,通过抑制血管的生成从而抑制肿瘤的生长和转移已成为治疗肿瘤的一个新方向。在一系列促进血管生成的因素中,血管内皮生长因子(VEGF)被认为是作用最强﹑特异性最高的促血管生成因子之一,它可以高效特异地作用于血管内皮细胞,促进新生血管的形成。因此,VEGF已成了目前抗肿瘤血管生成进而抑制肿瘤的生长和发展的一个重要靶点,而鼻咽癌(NPC)是我国南方最常见的恶性肿瘤。本文将研究VEGF及其受体FLK1在鼻咽癌中的表达,探讨VEGF与鼻咽癌生长的关系,从而为临床治疗鼻咽癌提供理论依据。
1 材料与方法
1.1 材料
1.1.1 主要试剂 SP9000通用型试剂盒、DAB显色试剂盒、多聚赖氨酸等,均购自北京中山公司。
1.1.2 标本来源 收集广东省韶关市粤北人民医院2001~2005年存档石蜡标本70例,其中鼻咽黏膜慢性炎标本30例,鼻咽癌标本40例(分型均为鼻咽分化型未角化癌)。其中男43例,女27例,年龄16~75岁,中位年龄45岁。所有病历资料完整,诊断前未接受任何抗癌治疗。
1.2 实验方法 采用免疫组织化学染色采用链霉素抗生物素过氧化物酶(SP)法,检测30例鼻咽黏膜慢性炎和40例鼻咽癌组织中VEGF、FLK1的表达。
1.3 结果判断 每一批免疫组化均设有已知阳性对照和用PBS代替一抗的空白对照,阳性表达定位于细胞膜或细胞质,均呈棕黄色或棕褐色颗粒样分布。由两人分别独立对实验结果进行双盲法评估。每一切片随机选择3个视野(×100),在显微镜(×400)下计数每个视野100个肿瘤细胞中阳性细胞的比例,非癌组织则计数着色区100个细胞中阳性细胞的比例,取3个视野的平均百分数为判定结果。光学显微镜下观察,根据棕黄色阳性信号的强弱和面积判断结果:阳性细胞<10%为阴性表达;10%~50%为阳性表达;>50%为强阳性表达。结果判断:按阳性细胞百分率计分:阳性细胞<10%计0分;10%~50%计1分;>50%计2分。(2)按染色强弱计分:淡黄色计0分;黄色计1分;棕黄色计2分。两项合并得0~1分为阴性;2~3分为阳性;4分为强阳性。
1.4 统计学方法 实验数据资料统计采用统计软件SPSS 11.0做四格表的卡方检验,Spearman相关分析。P<0.05差异有显著性。
2 结果
2.1 VEGF与FLK1在鼻咽黏膜慢性炎和鼻咽癌中的表达 30例鼻咽黏膜慢性炎中有6例VEGF在黏膜上皮细胞中呈阳性表达,阳性率为20.00%(6/30)。FLK1有7例表达呈阳性,阳性率为13.33%(4/30)。鼻咽癌组织中VEGF在肿瘤细胞中呈阳性表达,而FLK1在肿瘤细胞和内皮细胞均有阳性表达,阳性率分别为82.50%(33/40)和75.00%(30/40),与鼻咽黏膜慢性炎组比较,差异均有极显著性(P<0.001)(见表1,图1~5)。
表1
VEGF与FLK1在鼻咽黏膜慢性炎及鼻咽癌中的表达
组别NVEGFPositive(%)FLK1Positive(%)
鼻咽黏膜慢性炎306(20.00)4(13.33)
鼻咽癌4033(82.50)30(75.00)
注:χ2检验:VEGF与FLK1的表达在鼻咽黏膜慢性炎组和鼻咽癌组间比较,差异均有极显著性(P<0.001),χ2值分别为27.140,26.097。
2.2 鼻咽癌中VEGF和FLK1表达的相关分析 FLK1在鼻咽癌组织中的肿瘤细胞和内皮细胞中均有表达,而且与VEGF的表达呈高度正相关。Spearman相关分析结果为:r=0.582,P<0.001(见表2)。
表2
鼻咽癌中VEGF和FLK1表达的相关分析
(Spearman相关分析)
VEGF
FLK1
+++
700
+250
++1421
Spearman相关分析:VEGF与FLK1的表达具有相关性,r=0.582,P<0.001。
图1 空白对照(SP×200)
图2 VEGF在鼻咽黏膜慢性炎中的阳性表达(SP×200)
图3 VEGF在鼻咽癌中的强阳性表达(SP×200)
图4 FLK1在鼻咽黏膜慢性炎中的阳性表达(SP×200)
图5 FLK1在鼻咽癌中的强阳性表达(SP×200)
3 讨论
血管内皮生长因子(VEGF)被认为是作用最强﹑特异性最高的促血管生成因子之一,它通过旁分泌机制高效特异地作用于血管内皮细胞,促进新生血管的形成[1,2]。新生血管不仅是肿瘤生长的必需条件,同时又为肿瘤细胞的浸润转移创造了条件[3,4]。抑制肿瘤血管形成,是目前抗肿瘤研究的一个重要方向。病理状态下,VEGF可在全身多种组织器官的实体瘤中表达增高,报道较多的有乳腺癌﹑卵巢癌等[5,6]。近年来有研究发现,VEGF在鼻咽癌中也有不同程度的表达[7,8]。本实验中,通过免疫组织化学方法检测了40例鼻咽癌组织中VEGF蛋白的表达。结果表明,33例VEGF蛋白表达阳性,阳性率高达82.50%;而30例鼻咽炎中只有6例在鼻咽黏膜上皮中有VEGF的表达。提示,VEGF在鼻咽癌中的高表达可能是促进鼻咽癌发展的一个因素。
研究发现,肿瘤细胞除了以旁分泌的方式作用于肿瘤血管内皮细胞上的特异性VEGF受体调控内皮细胞分化和血管形成以外,在肿瘤中还存在VEGF的自分泌机制。在人类的一些肿瘤中发现,肿瘤细胞也有VEGFR1(Flt1)和VEGFR2(FLK1)的表达(其中多数肿瘤细胞以表达FLK1为主),这是肿瘤组织中VEGF自分泌机制存在的物质基础[9,10]。VEGF可通过自分泌途径促进肿瘤细胞自身的增殖和生长[11,12],这使人们对VEGF的生物学活性有了崭新的认识。VEGF一方面以旁分泌方式作用于肿瘤血管内皮细胞并诱导肿瘤血管新生,另一方面也可通过自分泌途径与自身表面的受体结合而促进肿瘤细胞增殖和侵袭、抑制细胞凋亡[13,14],同时也通过促进肿瘤细胞的增殖增加VEGF的分泌,加强其诱导肿瘤血管新生的旁分泌作用。
本实验发现在鼻咽癌细胞中也有FLK1的高表达,40例鼻咽癌组织中有30例表达阳性,阳性率为75.00%,并且与VEGF表达呈正相关(r=0.582,P<0.001)。这也提示了在鼻咽癌中也存在VEGF的自分泌机制,它可能通过自分泌方式与受体FLK1结合,促进鼻咽癌细胞自身的存活、增殖等。
VEGF既可以通过旁分泌方式作用于血管内皮细胞,促进肿瘤血管形成,从而促进鼻咽癌的生长和转移,同时又可能也通过自分泌方式作用于肿瘤细胞本身,直接促进鼻咽癌细胞的增殖。这些都表明VEGF对鼻咽癌的增殖﹑发展起到了一定的作用,抑制VEGF的表达可能是某些药物有效治疗鼻咽癌的一个重要机制之一。
参 考 文 献
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