湖北地方品种江汉鸡种鸡禽白血病净化初报

材料与方法

1.1  试验动物

湖北省农业科学院畜牧兽医研究所家禽试验场江汉鸡3个新品系和保种群H1、H2、H3、H 4个种群，其中H1、H2为快羽系，H3为慢羽系，H为江汉鸡保种群。

1.2  主要试剂

禽白血病ALV p27抗原ELISA检测试剂盒采用美国IDEXX公司产品。

1.3  净化方案

参考崔治中等[7]净化方案和净化技术规程[8]，结合该试验场实际情况提出了适用于该场禽白血病净化的方法。即在净化前期，应用商品化ELISA检测试剂盒，对核心群40～45周龄（纯繁前）ALV p27抗原检测，经过2个世代检测淘汰阳性鸡，阳性率下降到一定程度时增加检测强度，即在6周龄（肛拭子）、20～24周龄（开产时）和40～45周龄（精液、蛋清）3个时间节点，采用ELISA方法进行ALV p27抗原检测，淘汰阳性个体，以达到禽白血病净化目的。

1.4  样品的采集和处理

1.4.1  样品的处理和检测  6周龄采集泄殖腔棉拭子（以下简称肛拭子）混匀后置-20 ℃冻融3次待检;在20～24周龄和40～45周龄，全群公鸡分别采集精液置-20 ℃冻融3次待检，每只母鸡分别收集3枚蛋，吸取蛋清，混匀后置-20 ℃冻融3次待检。

1.4.2  ALV p27抗原检测  按照ALV p27抗原ELISA检测试劑盒（IDEXX公司）说明书操作。结果判定标准：S/P值≥0.2，为阳性;S/P值<0.2，为阴性。

2  结果与分析

2.1  公鸡禽白血病检测结果

江汉鸡各品系公鸡在4个世代的净化过程中，进行肛拭（6周龄）/精液（20～24周龄和40～45周龄）ALV p27抗原检测的样品总共5 238份，其中检测出阳性样品439份（表1）。

4个种群公鸡精液ALV p27抗原平均阳性率从2015年40～45周龄的30.54%降至2018年40～45周龄的0.23%，净化效果明显，公鸡禽白血病阳性率见表2。

由表2可知，随着检测净化次数的增加及净化世代的递增，公鸡精液ALV p27阳性率总体呈现下降的趋势。在2017年，40周龄的4个品种（品系）公鸡精液ALV p27阳性率均降低到3%以下;虽然2018年，20周龄和40周龄公鸡精液ALV p27未检测出阳性或阳性率保持在较低水平，但20周龄精液ALV p27检测除H2品系阳性率0.68%外，其他品系未检测出阳性，40周龄的H2品系精液未检测出ALV p27抗原阳性，而H3品系精液ALV p27阳性率0.79%。

2017年在6周龄时仅对H系公鸡进行肛拭子检测，ALV p27阳性率为16.84%，2018年在6周龄时分别对各品系公鸡肛拭子进行ALV p27检测，发现阳性率分别比上一世代40W检测阳性率偏高，但20～24周龄精液ALV p27阳性率比上一世代40～45周龄低。

2.2  母鸡禽白血病检测结果

江汉鸡各品系母鸡在4个世代的净化过程中，进行肛拭（6周龄）/蛋清（20～24周龄和40～45周龄）ALV p27抗原检测的样品共38 950份，其中检测出阳性样品1 677份见表3，每次检测结束，阳性鸡全部淘汰。

4个种群母鸡ALV p27平均阳性率从2015年45周龄的26.98%降至2018年45周龄的0.05%，净化效果显著，各世代母鸡检测阳性率见表4。

随着检测净化次数的增加以及世代的递增，蛋清ALV p27抗原阳性率总体呈现下降的趋势（表4）。其中，H1、H2、H品系蛋清ALV p27抗原阳性率降低效果明显。2017年，H1、H2和H品系40周龄母鸡蛋清ALV p27抗原阳性率已经降低至2%以下，2018年，H1品系20周龄ALV p27抗原未检测发现阳性。2015年，H3品系45周龄蛋清阳性率高达31.02%，经过两个世代的检测净化，2017年24周龄蛋清阳性率比2015年45周龄的阳性率降低27.12%，2018年40周龄的阳性率又再次降低，仅为0.16%。

3  讨论

目前，禽白血病既无有效的治疗方法，也无有效的疫苗可供使用。预防和控制禽白血病暴发的主要措施就是对种鸡群进行净化，从而实现种鸡群中禽白血病的彻底清除。本研究采用“公母同检，精液、蛋清检测为主，肛拭子检测为辅”的净化方案，即前2个世代在纯繁前公鸡用精液、母鸡利用蛋清进行ALV p27抗原检测，淘汰阳性个体，后期每个世代增加6周龄肛拭子检测ALV p27抗原，取得显著效果。4个种群纯繁前公鸡精液ALV p27抗原检测平均阳性率从2015年的30.54%降至2018年纯繁前的0.23%;4个种群纯繁前母鸡蛋清ALV p27抗原检测平均阳性率从2015年的26.98%降至2018年纯繁前的0.05%。

虽然在6周龄肛拭子检测ALV p27抗原阳性率均比上一世代纯繁前精液和蛋清检测ALV p27抗原阳性率有上升的情况，但是4个种群总体都表现出持续稳定下降的趋势，出现这种情况可能是在孵化、育雏阶段发生该病的水平传播，也可能是肛拭子检测出现假阳性或者与内源性禽白血病干扰有关，杨飞跃等[9]对肛拭子进行检测发现ELISA检测阳性率比病毒分离高，推测可能是由于内源性病毒的干扰所致;俞燕等[10]证明肛拭子ALV p27抗原检测淘汰阳性鸡虽能有效地降低鸡群禽白血病感染率，但p27抗原检测不能完全取代病毒分离检测。因为病毒分离检测周期长，本研究中未选择病毒分离检测的国际金标准进行净化，具体原因有待于进一步研究。在禽白血病净化的同时，试验鸡场应采取防鼠、防鸟及加强环境消毒等生物安全措施，并对试验鸡免疫选用的所有活疫苗进行严格检测，以确保没有外源性禽白血病污染。

参考文献：

[1] PAYNE L N，NAIR V. The long view：40years of avian leukosis research[J].Avian pathol，2012，41（1）：11-19.

[2] PAYNE L N，BROWN S R，BUMSTEAD N，et al. A novel subgroup of exogenous avian leucosis virus in chickens[J].J Gen Virol，1991，72：801-807.

[3] 杜  岩，崔治中，秦爱建，等.鸡的J亚群白血病病毒的分离及部分序列比较[J].病毒学报，2000，16（4）：341-346.

[4] 崔治中，张  志，杜  岩.我国肉用型鸡群中J亚群白血病流行现状的调查[J].中国预防兽医学报，2002，24（4）：292-294.

[5] 王培坤，秦丽莉，毕玉彧，等.广西麻鸡感染A亚群与J亚群禽白血病病毒的诊断[J].中国家禽，2015，37（5）：56-58.

[6] 崔治中.我国鸡群中禽白血病流行现状和对策[J].中国家禽，2009，31（13）：1-3.

[7] 崔治中，孙淑红，赵  鹏，等.对种鸡场禽白血病净化方案的建议[J].中国家禽，2014，36（1）：3-6.

[8] DB42/T 1128-2015，湖北地方品种鸡禽白血病净化技术规程[S].

[9] 杨飞跃，吴  艳，黄  翌，等.禽白血病p27抗原检测阳性与病毒分离的相关性比较[J].中国兽医杂志，2012，48（5）：26-29.

[10] 俞  燕，朱鸿媛，高明燕，等.地方鸡种禽白血病病毒感染动态及检测方法比较[J].中国家禽，2014，36（8）：23-26.

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